SPE固相萃取小柱作用機(jī)理解讀

更新時(shí)間：2025-12-10

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　　SPE固相萃取小柱的作用機(jī)理基于液-固相色譜理論，通過選擇性吸附與選擇性洗脫實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物的分離、純化和富集，其核心原理及關(guān)鍵步驟如下：

　　一、SPE固相萃取小柱核心作用機(jī)理

　　1.選擇性吸附

　　當(dāng)復(fù)雜樣品溶液通過SPE小柱時(shí)，吸附劑（如硅膠鍵合相、聚合物等）通過極性相互作用、疏水作用、離子交換或螯合作用等，選擇性保留目標(biāo)化合物及少量性質(zhì)相近的組分，而其他雜質(zhì)則隨流動(dòng)相（樣品基質(zhì)）流出小柱。

　　示例：在反相萃取中，非極性吸附劑（如C18）會(huì)優(yōu)先吸附非極性目標(biāo)物（如藥物分子），而極性雜質(zhì)（如糖類、無機(jī)鹽）則直接穿透。

　　2.選擇性洗脫

　　通過調(diào)整洗脫溶劑的極性、pH或離子強(qiáng)度，打斷目標(biāo)物與吸附劑之間的相互作用力，使其從吸附劑上解吸并隨洗脫液流出，實(shí)現(xiàn)目標(biāo)物與殘留雜質(zhì)的分離。

　　二、SPE固相萃取小柱關(guān)鍵步驟與影響因素

　　1.活化（Activation）

　　目的：使吸附劑表面官能團(tuán)充分展開，并去除可能存在的干擾物質(zhì)。

　　方法：反相柱常用甲醇潤濕，正相柱用非極性溶劑（如正己烷）處理。

　　影響：活化不足可能導(dǎo)致吸附效率下降，活化過度可能破壞吸附劑結(jié)構(gòu)。

　　2.上樣（Loading）

　　目的：將樣品溶液通過SPE柱，使目標(biāo)物被吸附劑保留。

　　條件：需控制樣品溶劑的極性。例如，反相萃取中樣品應(yīng)溶于水或低比例有機(jī)溶劑，以避免目標(biāo)物直接穿透。

　　風(fēng)險(xiǎn)：若樣品基質(zhì)復(fù)雜（如含大量蛋白質(zhì)或顆粒物），可能堵塞篩板或競爭吸附位點(diǎn)，導(dǎo)致回收率降低。

　　3.淋洗（Washing）

　　目的：去除與目標(biāo)物性質(zhì)相近的干擾雜質(zhì)，同時(shí)避免目標(biāo)物損失。

　　方法：選擇與上樣溶劑極性相近但洗脫強(qiáng)度稍強(qiáng)的溶劑。例如，反相柱可用5%甲醇-水沖洗。

　　平衡點(diǎn)：需在凈化效果與回收率間找到優(yōu)解，避免過度淋洗導(dǎo)致目標(biāo)物流失。

　　4.洗脫（Elution）

　　目的：用強(qiáng)洗脫溶劑將目標(biāo)物從吸附劑上解吸并收集。

　　方法：洗脫溶劑的極性應(yīng)與目標(biāo)物-吸附劑相互作用力匹配。例如，反相柱常用100%甲醇或乙腈洗脫。

　　優(yōu)化：可通過梯度洗脫或分步洗脫提高選擇性，減少雜質(zhì)共洗脫。